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| A New Potent Inhibitor of Necrotic Cell Death ; Novel Therapeutic Effect Against Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury |
| 서울대학교병원 순환기내과¹, 서울대학교 심혈관연구실² |
| 김지현¹, 김주영² , 이재원² , 조현재¹ , 김효수¹ , 오병희¹ , 박영배¹ |
배경 및 목적: 급성심근경색의 치료에 있어 신속한 재관류 요법이 필수적이나, 역설적으로 재관류로 인한 백혈구 침착, 산화물 축적 등이 오히려 심근세포를 손상시키는 재관류 손상(myocardiac ischemia/reperfusion injury)을 유발할 수 있다. 이런 재관류 손상을 예방하기 위한 여러 연구가 진행되어 왔다. 본 연구의 목적은 HMGB1 억제제로 개발되어 강력한 항산화효과와 타 장기에서 허혈/재관류 손상에 예방 효과가 있는 것으로 알려진 LG chemical의 전처치를 통해 심근세포(cardiomyocytes) 괴사억제 효과에 대해 평가해 보고자 한다.
실험 방법 : Sprague-Dawley 백서의 좌관상동맥을 일시적으로 결찰한 후 45분 뒤 재관류를 하였다. 대조군(증류수 경구 투여), LG chemical 투약군(10mg/kg, 경구 투여)에 대해 관상동맥 결찰 전 3일전부터 14일까지 해당 약제를 투약하였고 관상동맥 결찰 전, 결찰 후 1주, 2주 째 심장초음파도를 이용하여 좌심실 구혈율과 국소벽운동 이상 정도를 평가하였다. 2주 째 희생시킨 백서의 좌심실을 절편하여 Evan’s blue 와 triphenyltetrazolium chloride 이중 염색을 하여 허혈 범위에 대한 심근 경색 범위의 비율을 구해 경색 범위를 측정하였고 세포자멸의 정도는 조직 표본의 TdT-mediated dUDP nick end labeling(TUNEL)염색으로 평가하였다. 동물 실험과 함께 세포 내 재관류 손상 예방 효과를 평가하고자 H9C2 세포의hypoxia /reoxygenation 조건에서 LG chemical을 처리한 군과 대조군으로 나누어 배양, 형광 현미경과 유세포분석을 이용하여 세포 자멸사와 세포 괴사의 정도를 비교하였다.
결과 : 허혈/재관류 백서 모델의 심장초음파도 상 LG chemical 투약군에서 높은 좌심실 구혈율과 낮은 국소벽운동 장애가 관찰되었다. Double staining 상 경색 위험부위의 분포 정도는 LG chemical 처리군에서 유의하게 낮았고 TUENL 염색 상의 세포자멸 정도는 유의한 차이를 보이지 않았다. Hypoxic condition 후 reoxygenation 30분 전 LG chemical 20uM 을 전처치한 H9C2 세포에서 reoxygenation 후 형광 현미경으로 세포 관찰시 FDA 에 염색되는 viable cell의 수가 유의하게 많았고 괴사된 세포에서 염색되는 propium iodide(PI) 에 염색된 세포의 수는 적었다. 이는 FACS 분석 결과에서도 동일한 양상을 보여 PI 에 염색된 세포의 분포는 LG chemical 처리군에서 유의하게 낮았으나 annexin-V 에 염색되는 세포수는 LG chemical 투약군과 대조군간에 유의한 차이를 보이지 않았다.
결론 : 본 연구에서 LG chemical 은 심근경색증의 재관류 요법시 불가피하게 발생하는 허혈/재관류 손상을 예방하는 효과를 가지며 이는 세포 자멸사가 아닌 세포 괴사에서 기인하는 것이다.
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